一、簡(jiǎn)介

• SF9昆蟲(chóng)細(xì)胞是源于草地貪夜蛾蛹卵巢組織的一種重要真核細(xì)胞系，其培養(yǎng)原理是通過(guò)模擬昆蟲(chóng)體內(nèi)的生理環(huán)境（適宜溫度、營(yíng)養(yǎng)及氣體交換），以支持細(xì)胞增殖并作為桿狀病毒的宿主，從而實(shí)現(xiàn)高水平重組蛋白的表達(dá)。

常用配置：

• 溫度：27℃

• 轉(zhuǎn)速：120-140 rpm（懸浮培養(yǎng)）

二、方案詳情

• 典型場(chǎng)景：

SF9細(xì)胞最主要的應(yīng)用是與桿狀病毒表達(dá)系統(tǒng)（如Bac-to-Bac系統(tǒng)）相結(jié)合，用于高水平表達(dá)復(fù)雜的重組蛋白、病毒樣顆粒和疫苗抗原，是生物制藥和基礎(chǔ)研究中的重要工具。

• 配置參數(shù)與原理：

溫度： SF9細(xì)胞的培養(yǎng)溫度必須嚴(yán)格控制在26-28℃之間，通常設(shè)定為27℃。這是因?yàn)樽鳛槔ハx(chóng)來(lái)源的細(xì)胞，其最適生長(zhǎng)溫度遠(yuǎn)低于哺乳動(dòng)物細(xì)胞。溫度是影響細(xì)胞生長(zhǎng)和蛋白表達(dá)的關(guān)鍵因素，一旦培養(yǎng)溫度超過(guò)30℃，將導(dǎo)致細(xì)胞熱應(yīng)激、生長(zhǎng)停滯甚至大規(guī)模死亡，造成不可逆的損傷。因此，培養(yǎng)箱的溫度校準(zhǔn)與持續(xù)監(jiān)控至關(guān)重要

轉(zhuǎn)速： 在進(jìn)行懸浮培養(yǎng)時(shí)，轉(zhuǎn)速通常設(shè)置在120至140 rpm的范圍內(nèi)。這一轉(zhuǎn)速能夠確保細(xì)胞在培養(yǎng)基中均勻懸浮，避免沉降，同時(shí)為細(xì)胞生長(zhǎng)提供充足的氣體交換（氧氣傳遞）。轉(zhuǎn)速過(guò)低會(huì)導(dǎo)致細(xì)胞聚集和缺氧；過(guò)高則會(huì)產(chǎn)生過(guò)大的剪切力，對(duì)細(xì)胞造成機(jī)械損傷。此外，為了保障氣體交換效率，培養(yǎng)體積一般不超過(guò)搖瓶總?cè)萘康?span dir="ltr" style="border: 0px solid;box-sizing: border-box;padding: 0px">2/5。

• 注意事項(xiàng)與操作要點(diǎn)：

進(jìn)行SF9細(xì)胞培養(yǎng)時(shí)，以下幾個(gè)環(huán)節(jié)需要特別注意：

1. 溫度敏感性：SF9細(xì)胞對(duì)溫度極為敏感。培養(yǎng)溫度絕對(duì)不能高于30℃，否則會(huì)導(dǎo)致細(xì)胞不可逆的損傷。即使在復(fù)蘇等短暫脫離培養(yǎng)環(huán)境的操作中，也應(yīng)盡快完成，避免長(zhǎng)時(shí)間置于室溫或更高溫度下。

2. 避免機(jī)械損傷：SF9細(xì)胞對(duì)吹打、氣泡等機(jī)械力非常敏感。所有操作，如重懸、傳代吹打，都必須動(dòng)作輕柔，盡量避免產(chǎn)生過(guò)多氣泡，以維持細(xì)胞高活力。

3. 細(xì)胞形態(tài)觀察：培養(yǎng)過(guò)程中觀察到細(xì)胞內(nèi)有一些黑色顆粒屬于正常現(xiàn)象，是細(xì)胞自身的分泌泡和細(xì)胞器折光。在貼壁培養(yǎng)一段時(shí)間后，部分細(xì)胞可能會(huì)伸出較長(zhǎng)的觸角，這也并非污染或狀態(tài)不佳的表現(xiàn)。若細(xì)胞外的碎片增多，可通過(guò)低速離心換液的方式清除。

4. 復(fù)蘇與凍存：復(fù)蘇后建議在24小時(shí)內(nèi)更換一次新鮮培養(yǎng)基，以去除死亡細(xì)胞釋放的有害物質(zhì)。凍存時(shí)建議使用程序性降溫盒，并定期復(fù)蘇檢查庫(kù)存細(xì)胞的活性，以確保種子細(xì)胞庫(kù)的質(zhì)量。

三、文獻(xiàn)出處

1. O'Reilly, D. R., Miller, L. K., & Luckow, V. A. (1992). Baculovirus Expression Vectors: A Laboratory Manual. W.H. Freeman and Company

   說(shuō)明：這本書是桿狀病毒表達(dá)系統(tǒng)領(lǐng)域的經(jīng)典手冊(cè)，詳細(xì)闡述了包括SF9在內(nèi)的昆蟲(chóng)細(xì)胞系的基礎(chǔ)生物學(xué)、培養(yǎng)方法和轉(zhuǎn)染、感染實(shí)驗(yàn)流程。

2. Luckow, V. A., & Summers, M. D. (1988). Trends in the development of baculovirus expression vectors. *Bio/Technology, 6*(1), 47-55.

   說(shuō)明：這篇高影響力的綜述文章系統(tǒng)回顧了桿狀病毒載體的發(fā)展歷程，并明確了SF9等細(xì)胞系在系統(tǒng)優(yōu)化中的關(guān)鍵作用。